N-亚硝胺二甲胺（NDMA）是一种具有N-N=O 结构的化合物，该化合物能与DNA反应使其烷基化，进而致癌。美国FDA曾爆出成品胃药雷尼替丁中含有超过限量要求的亚硝胺类致癌物N-亚硝胺二甲胺，FDA 发布公告：召回美国市场上雷尼替丁产品，该公告中提到某些产品中的NDMA 含量会随着时间推移而有所增加，进而可能导致杂质含量高于可接受水平。国内外多家药品生产企业都曾因消化系统药雷尼替丁中检出超限NDMA而启动召回。因此，监管机构以及生产商需要一种分析检测方法，来检测该类药物中的N-亚硝胺二甲胺，切实保障人民用药安全。LC-MS/MS 方法具有高灵敏度、高分辨力、快速分析、结果准确等优势，可降低基质干扰造成的假阴性或假阳性发生可能性，可以满足药品检测较严格的灵敏度、专属性和准确度要求。本文使用谱育科技EXPEC 5210三重四极杆液质联用系统，开发适用于APCI源的LC-MS/MS方法，用于测试和定量雷尼替丁原料胶囊和片剂中的N-亚硝胺二甲胺。

实验部分

标准品、试剂和设备

      标准品：N-亚硝胺二甲胺标准品购自中国食品药品检定院，于-20℃冰箱保存。

      样品：盐酸雷尼替丁胶囊，标号136#、105#、104#、61#、12#

      试剂：甲醇为色谱级，购自默克、甲酸为LC-MS级，购自安谱。  

      仪器：ULC 510超高效液相色谱仪（具体配有二元超高压输液泵、超高压自动进样器、柱温箱）、EXPEC 5210三重四极杆串联质谱仪。

液相和质谱条件

       监测模式为多反应监测(MRM)，N-亚硝基二甲胺化合物监测离子对、锥孔电压、碰撞能量等参数见下图。

样品前处理

      参考质谱法（中国药典2015年版四部通则0431）测定，具体前处理步骤如下：

      盐酸雷尼替丁胶囊供试品溶液制备：取胶囊内容物适量，相当于雷尼替丁300mg，至50mL离心管中，精密加入甲醇10mL，涡旋混匀1min，再振荡40min，离心，取上清液滤过，取续滤液即得。

实验结果

      线性：精密称取N-亚硝基二甲胺对照品适量，加甲醇溶解并定量稀释制成1mL中含1、2、5、10、50、100、250、500ng的溶液。按照上述方法依次进样分析，采用外标法拟合后的标准曲线如下图1所示，不同浓度N-亚硝基二甲胺谱图叠加图如图2所示。

图1 N-亚硝基二甲胺标准曲线

图2  N-亚硝基二甲胺色谱叠加图（线性不同浓度）

      灵敏度：精密称取N-亚硝基二甲胺对照品适量，加甲醇溶解并定量稀释制成1mL中含1ng的溶液，该溶液进样测试色谱主峰的信噪比不低于10。

      稳定性：精密称取N-亚硝基二甲胺对照品适量，加甲醇溶解并定量稀释制成1mL中含2ng的溶液，重复进样6次，峰面积的RSD值为2.34%，符合所得峰面积的相对标准偏差不得超过10%的要求。

      加标回收率：盐酸雷尼替丁胶囊样品136#中N-亚硝基二甲胺含量未检出作为空白样品，精密称取300 mg后分别加入不同浓度的标品，按照前处理步骤进行前处理平行处理6个，进样测试后计算回收率。加标后溶液中N-亚硝基二甲胺浓度分别为：2 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL。

样品测试结果

      盐酸雷尼替丁胶囊按照上述样品前处理和仪器方法，样品平行3次，每个平行样品连续进样2次，最终取平均值作为测试结果，测试结果汇总如下表4所示。

表4 盐酸雷尼替丁胶囊样品中N-亚硝基二甲胺测试结果汇总表

*ND=Not Detected

图3盐酸雷尼替丁胶囊样品中N-亚硝基二甲胺测试谱图

结语

      本文使用谱育科技EXPEC 5210 LC-MS/MS对盐酸雷尼替丁胶囊中N-亚硝基二甲胺含量进行检测，考察方法的线性、灵敏度、稳定性、加标回收率。该方法简单灵敏准确，可以较好地满足盐酸雷尼替丁胶囊中N-亚硝基二甲胺的检测要求。

      完整报告下载：LC-MSMS法测定盐酸雷尼替丁胶囊中N-亚硝基二甲胺

• 附录

设备与耗材方案

一、EXPEC 5210 配置详情

二、标准品